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1.蜜桃视频网页版合成的基本原理?
蜜桃视频网页版固相合成法是蜜桃视频网页版合成化学的一个重大的突破。它的最大特点是不必纯化中间产物,合成过程可以连续进行,进而为蜜桃视频网页版合成的自动化奠定了基础。目前全自动蜜桃视频网页版的合成,基本都是固相合成。其基本过程如下:
基于Fmoc化学合成,先将所要合成的目标蜜桃视频网页版的C-端亚洲AV蜜桃综合的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这一亚洲AV蜜桃综合的氨基作为蜜桃视频网页版合成的起点,同其它的亚洲AV蜜桃综合已经活化的羧基作用形成肽键,不断重复这一过程,即可得到蜜桃视频网页版。根据蜜桃视频网页版的亚洲AV蜜桃综合组成不同,蜜桃视频网页版后处理方式不同,纯化方式也有差异。
2.蜜桃视频网页版状态是如何?如何保存储存?
蜜桃视频网页版提供的蜜桃视频网页版是粉末状,一般为灰白色,组成不同,蜜桃视频网页版粉末的颜色有差异,蜜桃视频网页版一般长期保存需要避光保存,并应保存在-20度,短期可以保存在4度。可以短时间的话是以室温运输。
3.如何溶解蜜桃视频网页版?
因为蜜桃视频网页版溶解比较复杂,通常是先取一点试验,在没有确定合适的溶剂前请勿全部溶解。
下列为选择溶解溶剂的一般方法:
(1)判定蜜桃视频网页版的电荷特定,设定酸性亚洲AV蜜桃综合Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1;碱性亚洲AV蜜桃综合Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它亚洲AV蜜桃综合的电荷为0。计算出净电荷数。
(2)如果净电荷数 >0,蜜桃视频网页版为碱性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果蜜桃视频网页版还不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(3)如果净电荷数<0,蜜桃视频网页版为酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(4)如果净电荷数=0,蜜桃视频网页版为中性,一般需要用有机溶剂如乙腈,甲醇或异丙醇,DMSO等溶解。还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的蜜桃视频网页版。
4.非HPLC纯化的蜜桃视频网页版和经过HPLC纯化的蜜桃视频网页版有何区别?
粗品和脱盐级别的蜜桃视频网页版中杂质为蜜桃视频网页版和非蜜桃视频网页版类:如非全长蜜桃视频网页版和蜜桃视频网页版后处理的一些原料如DTT、TFA等;而经过HPLC纯化的蜜桃视频网页版,仍会有一些杂质存在,其中的杂质主要是短肽和微量TFA。
5.多长的蜜桃视频网页版为合适?
蜜桃视频网页版合成需要考虑蜜桃视频网页版的长度,电荷,亲疏水性等因素。长度越长,合成粗品的纯度和产率都随着降低,纯化的难度和无法合成的几率就会大些。当然蜜桃视频网页版功能区的序列是无法改变的,但是为了蜜桃视频网页版的顺利合成,有时不得不在功能区的上下游增加一些辅助亚洲AV蜜桃综合,以改善蜜桃视频网页版的溶解性和亲疏水性。如果蜜桃视频网页版太短,合成也可能有问题,主要问题是合成的蜜桃视频网页版在后处理过程中有一定的难度,5肽以下的蜜桃视频网页版,一般要有疏水的亚洲AV蜜桃综合,否则后处理难度加大。15个亚洲AV蜜桃综合残基以下的蜜桃视频网页版一般都可以得到满意的产率和得率。
6.如何从蜜桃视频网页版序列中判定蜜桃视频网页版的溶解性?
(1)蜜桃视频网页版中如果含有高比例的疏水性很强的亚洲AV蜜桃综合如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp,蜜桃视频网页版很难溶解于水性溶液中或根本不可能溶解。这些亚洲AV蜜桃综合无论是纯化或合成,都有可能有问题。
(2)一般情况下疏水性亚洲AV蜜桃综合的比例<50%,不能连续5个连续aa为疏水性,带电荷的亚洲AV蜜桃综合的(正电荷K,R,H,N-terminus,负电荷D,E,C- terminus)的比例达到20%,在蜜桃视频网页版的N或C短如果能增加极性亚洲AV蜜桃综合,也可以改善溶解性。
7.为什么含有Cys,Met,或Trp的蜜桃视频网页版难合成?
含有Cys, Met,或Trp的蜜桃视频网页版难以合成,同时难以获得高纯度的产品。主要因为这些基团不稳定,易氧化。这些蜜桃视频网页版的使用和储存都需要特别注意,避免反复开启盖子。
8.为什么有些蜜桃视频网页版的合成产率或纯度会比较低?
蜜桃视频网页版合成与引子合成有比较大的区别,不能合成的引子很少,但是不能合成的蜜桃视频网页版经常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr这些亚洲AV蜜桃综合比邻或重复时,蜜桃视频网页版链在合成过程中不能完全舒展溶解,合成效率下降。以下几种情形,合成效率和产物的纯度都比较低,如:重复Pro,Ser-Ser,重复Asp,4个连续Gly等.
9.蜜桃视频网页版是如何纯化的?
蜜桃视频网页版纯化一般使用反相柱(如C8,C18等),214nm。缓冲体系通常为含TFA的溶剂,pH 2.0 。Buffer A为含0.1%TFA in ddH2O,Buffer B为1%TFA/ACN/ pH 2.0。纯化前用Buffer A溶解;如果溶解不好,用Buffer B溶解后,然后用Buffer A稀释;对疏水性强的蜜桃视频网页版,有时还需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析蜜桃视频网页版粗产物,如果蜜桃视频网页版不长(15aa以下),一般会有主峰,主峰通常为全长产物;对于20aa以上的长肽,如果没有主峰,HPLC需搭配Mass来判定分子量,进而确定哪个峰是所要合成的蜜桃视频网页版.
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